В начале занятия берут заранее подготовленную морскую свинку (крысу), у которой в экссудате полости живота установлено скопление макрофагов. Выстригают шерсть по срединной линии кзади от пупка и кожу протирают эфиром и йодной настойкой. Набирают в шприц 3 мл 3% взвеси эритроцитов петуха, подогретой до 38°, производят прокол иглой на 6—8 см кпереди от лонного сращения, строго по срединной линии живота, в положении животного вниз головой. При этом задние лапки животного оттягивают назад и в стороны. Взвесь эритроцитов вводят в полость живота не быстро и отмечают время введения.
Через 15 минут у подопытного животного ножницами надрезают кожу живота по срединной линии, кзади от пупка; в месте надреза стерильной пастеровской пипеткой прокалывают брюшину и в пипетку набирают 1—1,5 мл экссудата. Для приготовления висячей капли переносят 5—7 капель экссудата на часовое стекло и смешивают с равным количеством капель краски нейтральной красной. Затем каждый студент изготовляет из экссудата мазок и препарат висячей капли. Через каждые 15—20 минут после первой пробы берут вторую и третью пробу экссудата и изготовляют мазки и препараты висячей капли.
В промежутках между взятием проб экссудата фиксируют и окрашивают мазки, затем изучают картину фагоцитоза в висячей капле. Мазки изучают после обработки третьей пробы. Картины фагоцитоза в каждой висячей капле и в каждом мазке зарисовывают и составляют протокол опыта,

1. На стекле с лункой делают непрерывный ободок из вазелина вокруг лунки. На протертое покровное стеклышко в центре помещают каплю экссудата (величиной с булавочную головку), смешанного с индикатором нейтральный красный. Покровное стеклышко накрывают стеклом с лункой так, чтобы капля проецировалась на середину лунки, но не прикасалась к ней. Затем весь препарат переворачивают покровным стеклом вверх, при этом капля экссудата повисает над лункой. Вазелиновый ободок обеспечивает герметичность лунки, чем предупреждается высыхание капли.
2. При малом увеличении микроскопа с суженной диафрагмой или с опущенным конденсором отыскивают край капли и на фоне желтовато-зеленых овальных эритроцитов находят красный комочек и помещают его в центр поля зрения, после чего устанавливают большое увеличение (объектив Х40).
3. Теперь красный комочек представляется макрофагом, внутри которого видны ярко-красные эритроциты. В зависимости от стадии фагоцитоза макрофаг может фиксировать на своей поверхности до 10—20 эритроцитов (желто-зеленого цвета), внутри макрофага будут находиться то цельные эритроциты, то их ядра, окруженные тонким ободком протоплазмы, то, наконец, лишь обломки ядер и зерна. В процессе переваривания фагоцитированные эритроциты окрашиваются в присутствии индикатора нейтральный красный в розовый, а затем в рубиново-красный цвет, что указывает на изменение реакции в кислую сторону. Эритроциты нефагоцитированные, а также свободные от эритроцитов макрофаги своей обычной окраски не меняют.

1. Небольшую каплю экссудата помещают на предметное стекло, на 1 см от его узкого края, и шлифованным ребром другого стекла делают длинный и широкий мазок. Высохший мазок помещают на решетку ванночки и заливают краской Май-Грюнвальда на 5 минут, затем добавляют приблизительно равное количество дистиллированной воды и мазок докрашивают еще в течение 3—5 минут. В первой фазе окрашивания необходимо подливать краску дополнительно, так как она быстро испаряется (иначе мазок будет испорчен). По окончании окрашивания краску сливают в ванночку, мазок промывают водопроводной водой и высушивают полосками фильтровальной бумаги1.
2. Высушенный мазок рассматривают под микроскопом с иммерсионной системой. В мазке определяют все фазы фагоцитоза и зарисовывают их.

Цель занятия. Изучить некоторые изменения в сердечной и дыхательной деятельности, в составе и свойствах крови, в моторной и секреторной функции желудка собаки с асептическим абсцессом.
ПОДГОТОВКА К ЗАНЯТИЮ
Студенты готовятся к занятию в объеме следующих вопросов.
1. Влияние исходного состояния организма на характер проявления и степень тяжести воспалительного процесса.
2. Влияние воспалительного процесса на организм. Изменения функции отдельных органов и систем при воспалении, причины и механизмы их возникновения и развития.
Техническое оснащение занятия1
1. Станки для собак
2. Установка для регистрации моторной деятельности желудка
3. Кимографы малые
4. Термометры для измерения температуры тела
5. Секундомеры
6. Смесители для лейкоцитов крови
7. Камера Горяева для подсчета лейкоцитов
8. Микроскоп
9. Аппарат Панченкова для определения скорости оседания эритроцитов
10. Часовое стекло
И. Бюретка для децинормального раствора едкого натра
12. Капельницы для индикаторов
13. Пипетки на 1 мл
14. Стаканчики на 30—50 мл узкие
15. Мерные цилиндры на 10 мл
16. Реактивы:
а) уксусная кислота (5% раствор, подкрашенный винь-кой)
б) лимоннокислый натрий (5% раствор)
в) едкий натр (0,1 н. раствор)
г) диметиламидоазобензол (0,5% спиртовой раствор)
д) фенолфталеин (1% спиртовой раствор)
17. Вата гигроскопическая
18. Спирт этиловый
19. Животные: собаки* (с фистулой желудка по Басову)

Общие изменения в организме при развитии острого воспалительного процесса (асептический абсцесс) у собаки. За 3—4 недели до занятия 2 собакам производят операцию наложения фистулы желудка по методу Басова. Одной из собак за 3 дня до занятия вводят под кожу бедра 2—3 мл стерильной 50% эмульсии скипидара в растительном масле, в результате чего развивается гнойное асептическое воспаление. Вторую собаку используют как контрольную. На занятии у обеих собак измеряют температуру тела, определяют число дыханий в минуту и частоту пульса. Из вены берут кровь для определения количества лейкоцитов и РОЭ. Кроме того, регистрируют моторную деятельность желудка, определяют величину желудочной секреции за каждые 30 минут и находят величину общей кислотности и свободной соляной кислоты в каждой получасовой порции желудочного сока.

В пробирку, находящуюся на водяной бане (в стаканчике с водой 37— 38°), берут 0,1 мл цитратной плазмы крови контрольной собаки, через 60 секунд прибавляют 0,1 мл 5% раствора хлористого кальция, перемешивают, одновременно пускают секундомер (или замечают время по секундной стрелке ручных часов). Отмечают время начала образования сгустка—время рекальцификации плазмы.
Через 3—4 минуты сгусток наматывают на стеклянную палочку, затем его извлекают из пробирки, тщательно высушивают путем сдавливания между двумя листками фильтровальной бумаги и взвешивают на торсионных весах. Получается количество воздушно-сухого фибрина.
Определения производятся и с плазмой подопытной собаки. Эти и все последующие определения дублируются.

В пробирку, находящуюся на водяной бане, берут 0,1 мл нормальной оксалатной плазмы и прибавляют 0,1 мл раствора тромбопластина. Через 30 секунд прибавляют 0,1 мл 0,55% раствора хлористого кальция и одновременно пускают секундомер. Отмечается время свертывания смеси — время протромбинового комплекса. Затем определяется время протромбинового комплекса плазмы подопытной собаки.
Протромбиновый индекс получается, если время протромбинового комплекса здоровой плазмы разделить на время протромбинового комплекса исследуемой плазмы и полученное частное умножить на 100.

Исследуемую оксалатную плазму нормальной собаки разводят физиологическим раствором в 20 раз. Определение ведут на водяной бане.
В пробирку вносят 0,1 мл старой донорской плазмы и 0,1 мл разведенной нормальной плазмы. Через 30 секунд добавляют 0,05 мл раствора тромбопластина и еще через 30 секунд прибавляют столько же 0,55% раствора хлористого кальция. Одновременно пускают секундомер и регистрируют время свертывания смеси. Таким же образом определяют время свертывания смеси с опытной плазмой.
Количество Ас-глобулина равно времени свертывания смеси с нормальной плазмой, разделенному на время свертывания смеси с опытной плазмой и умноженному на 100.

В пробирку, находящуюся на водяной бане, вносят 0,5 мл оксалатной плазмы от здоровой собаки и 0,1 мл раствора гепарина; через 60 секунд туда же вводят 1 мл 0,28% раствора хлористого кальция и одновременно пускают секундомер. Определяют время свертывания плазмы.
Определение проводится и с плазмой подопытной собаки.

В пробирку, находящуюся на водяной бане, вносят 0,1 мл цитратной плазмы здоровой собаки. Прибавляют 0,1 мл физиологического раствора и 0,1 мл раствора тромбина. Одновременно с введением тромбина пускают секундомер.
Время, прошедшее от момента введения тромбина до момента образования сгустка, является тромбиновым.
Определение делают и с плазмой подопытной собаки.