В начале занятия берут заранее подготовленную морскую свинку (крысу), у которой в экссудате полости живота установлено скопление макрофагов. Выстригают шерсть по срединной линии кзади от пупка и кожу протирают эфиром и йодной настойкой. Набирают в шприц 3 мл 3% взвеси эритроцитов петуха, подогретой до 38°, производят прокол иглой на 6—8 см кпереди от лонного сращения, строго по срединной линии живота, в положении животного вниз головой. При этом задние лапки животного оттягивают назад и в стороны. Взвесь эритроцитов вводят в полость живота не быстро и отмечают время введения.
Через 15 минут у подопытного животного ножницами надрезают кожу живота по срединной линии, кзади от пупка; в месте надреза стерильной пастеровской пипеткой прокалывают брюшину и в пипетку набирают 1—1,5 мл экссудата. Для приготовления висячей капли переносят 5—7 капель экссудата на часовое стекло и смешивают с равным количеством капель краски нейтральной красной. Затем каждый студент изготовляет из экссудата мазок и препарат висячей капли. Через каждые 15—20 минут после первой пробы берут вторую и третью пробу экссудата и изготовляют мазки и препараты висячей капли.
В промежутках между взятием проб экссудата фиксируют и окрашивают мазки, затем изучают картину фагоцитоза в висячей капле. Мазки изучают после обработки третьей пробы. Картины фагоцитоза в каждой висячей капле и в каждом мазке зарисовывают и составляют протокол опыта,

1. На стекле с лункой делают непрерывный ободок из вазелина вокруг лунки. На протертое покровное стеклышко в центре помещают каплю экссудата (величиной с булавочную головку), смешанного с индикатором нейтральный красный. Покровное стеклышко накрывают стеклом с лункой так, чтобы капля проецировалась на середину лунки, но не прикасалась к ней. Затем весь препарат переворачивают покровным стеклом вверх, при этом капля экссудата повисает над лункой. Вазелиновый ободок обеспечивает герметичность лунки, чем предупреждается высыхание капли.
2. При малом увеличении микроскопа с суженной диафрагмой или с опущенным конденсором отыскивают край капли и на фоне желтовато-зеленых овальных эритроцитов находят красный комочек и помещают его в центр поля зрения, после чего устанавливают большое увеличение (объектив Х40).
3. Теперь красный комочек представляется макрофагом, внутри которого видны ярко-красные эритроциты. В зависимости от стадии фагоцитоза макрофаг может фиксировать на своей поверхности до 10—20 эритроцитов (желто-зеленого цвета), внутри макрофага будут находиться то цельные эритроциты, то их ядра, окруженные тонким ободком протоплазмы, то, наконец, лишь обломки ядер и зерна. В процессе переваривания фагоцитированные эритроциты окрашиваются в присутствии индикатора нейтральный красный в розовый, а затем в рубиново-красный цвет, что указывает на изменение реакции в кислую сторону. Эритроциты нефагоцитированные, а также свободные от эритроцитов макрофаги своей обычной окраски не меняют.

1. Небольшую каплю экссудата помещают на предметное стекло, на 1 см от его узкого края, и шлифованным ребром другого стекла делают длинный и широкий мазок. Высохший мазок помещают на решетку ванночки и заливают краской Май-Грюнвальда на 5 минут, затем добавляют приблизительно равное количество дистиллированной воды и мазок докрашивают еще в течение 3—5 минут. В первой фазе окрашивания необходимо подливать краску дополнительно, так как она быстро испаряется (иначе мазок будет испорчен). По окончании окрашивания краску сливают в ванночку, мазок промывают водопроводной водой и высушивают полосками фильтровальной бумаги1.
2. Высушенный мазок рассматривают под микроскопом с иммерсионной системой. В мазке определяют все фазы фагоцитоза и зарисовывают их.

Цель занятия. Изучить некоторые изменения в сердечной и дыхательной деятельности, в составе и свойствах крови, в моторной и секреторной функции желудка собаки с асептическим абсцессом.
ПОДГОТОВКА К ЗАНЯТИЮ
Студенты готовятся к занятию в объеме следующих вопросов.
1. Влияние исходного состояния организма на характер проявления и степень тяжести воспалительного процесса.
2. Влияние воспалительного процесса на организм. Изменения функции отдельных органов и систем при воспалении, причины и механизмы их возникновения и развития.
Техническое оснащение занятия1
1. Станки для собак
2. Установка для регистрации моторной деятельности желудка
3. Кимографы малые
4. Термометры для измерения температуры тела
5. Секундомеры
6. Смесители для лейкоцитов крови
7. Камера Горяева для подсчета лейкоцитов
8. Микроскоп
9. Аппарат Панченкова для определения скорости оседания эритроцитов
10. Часовое стекло
И. Бюретка для децинормального раствора едкого натра
12. Капельницы для индикаторов
13. Пипетки на 1 мл
14. Стаканчики на 30—50 мл узкие
15. Мерные цилиндры на 10 мл
16. Реактивы:
а) уксусная кислота (5% раствор, подкрашенный винь-кой)
б) лимоннокислый натрий (5% раствор)
в) едкий натр (0,1 н. раствор)
г) диметиламидоазобензол (0,5% спиртовой раствор)
д) фенолфталеин (1% спиртовой раствор)
17. Вата гигроскопическая
18. Спирт этиловый
19. Животные: собаки* (с фистулой желудка по Басову)

Общие изменения в организме при развитии острого воспалительного процесса (асептический абсцесс) у собаки. За 3—4 недели до занятия 2 собакам производят операцию наложения фистулы желудка по методу Басова. Одной из собак за 3 дня до занятия вводят под кожу бедра 2—3 мл стерильной 50% эмульсии скипидара в растительном масле, в результате чего развивается гнойное асептическое воспаление. Вторую собаку используют как контрольную. На занятии у обеих собак измеряют температуру тела, определяют число дыханий в минуту и частоту пульса. Из вены берут кровь для определения количества лейкоцитов и РОЭ. Кроме того, регистрируют моторную деятельность желудка, определяют величину желудочной секреции за каждые 30 минут и находят величину общей кислотности и свободной соляной кислоты в каждой получасовой порции желудочного сока.

Цель занятия. Изучить стадии развития фагоцитоза при воспалении.
ПОДГОТОВКА К ЗАНЯТИЮ
Студенты готовятся к занятию в объеме следующих вопросов.
1. Фагоцитоз как защитная реакция организма при воспалении.
2. Учение И. И. Мечникова о воспалении.
3. Современные данные о механизме фагоцитарной реакции.
4. Связь фагоцитарной реакции с реактивностью организма.
Техническое оснащение занятия1
1.3% взвесь эритроцитов птицы в физиологическом растворе (пробирка с эритроцитами и шприц сохраняются при температуре 38° в термостате или ванне) 3 мл
2. Шприц на 5 мл с иглой и пинцетом в стерилизаторе 1 шт.
3. Ножницы глазные прямые в стерилизаторе 1 шт.
4. Пипетки пастеровские стерильные (3 пары) б шт.
5. Йодная настойка, эфир, вата, палочка для йода, ножницы
6. Морская свинка (или крыса). Животному за сутки, лучше за 36—40 часов до опыта, вводят в брюшную полость 8—10 мл стерильного мясо-пептонного бульона (пептона 1%), вызывающего асептическое воспаление брюшины с накоплением экссудата. За час до занятия вводят в брюшную полость 5 мл теплого стерильного физиологического раствора для разжижения экссудата 1 шт.
Для изучения фагоцитоза в висячей капле2
1. Предметное стекло с лункой
2. Покровное стекло
3. Вазелин в чашечке и стеклянная палочка
4. 0,02% раствор краски нейтральрот
5. Микроскоп с объективами Х20 и Х40
6. Пипетки пастеровские
Для изучения фагоцитоза в мазке2
1. Предметные стекла обезжиренные
2. Предметные стекла со шлифованными краями
3. Краска Май-Грюнвальда (или Романовского — Гимзе) в склянке с пипеткой
4. Ванночка для окраски или чашка Петри 1 шт.
5. Дистиллированная вода 100 мл
6. Фильтровальная бумага в полосках 10 шт.
7. Кедровое масло 5 мл
8. Метиловый спирт для фиксации мазков (в закрытых банках) 50 мл
9. Микроскоп с объективом Х90 1 шт.

Морфологическая картина гнойного экссудата (микроскопическое изучение гноя). На готовых мазках гноя, окрашенных по Май-Грюнвальду или по Романовскому — Гимзе, изучают и зарисовывают морфологическую картину гнойного экссудата. В мазках отмечают наличие так называемых гнойных клеток на разных стадиях распада (погибшие лейкоциты), клеток местной ткани, бактерий, эритроцитов, вновь образованных клеток и др.

В криоскопе с помощью термометра Бекмана определяют температуру замерзания гноя, а затем и сыворотки крови с точностью до 0,01°. Криоскоп состоит из толстостенного стеклянного широкого цилиндра (диаметром 12 см, высотой 18 см), который заполняют мелкобитым льдом с добавлением крупнозернистой поваренной соли.
Исследуемую жидкость наливают во внутреннюю пробирку до полного погружения в нее ртутного шарика термометра Бекмана. Рекомендуется готовить охлаждающую смесь так, чтобы ее температура была ниже предполагаемой температуры замерзания исследуемой жидкости на 6°. Ход исследования заключается в непрерывном спокойном помешивании исследуемой жидкости и в наблюдении за столбиком ртути. В начале опыта ртуть в термометре Бекмана заполняет не только весь капилляр, но и значительную часть верхнего расширения. По мере охлаждения жидкости объем ртути уменьшается и ее верхний мениск медленно опускается к началу капилляра, по которому столбик ртути опускается быстро и значительно ниже точки замерзания исследуемого раствора вследствие его переохлаждения. Если охлаждение раствора происходит равномерно, то кристаллизация всей его массы возникает одновременно. Быстрый переход жидкости в твердую фазу сопровождается выделением значительного количества «теплоты кристаллизации». Поэтому в момент возникновения кристаллизации жидкости столбик ртути стремительно поднимается и останавливается (выждать 30 секунд!) на уровне, соответствующем температуре замерзания испытуемой жидкости. Обычно точка замерзания гноя (от —0,8 до —1,5°) значительно ниже точки замерзания сыворотки крови (от —0,54 до —0,56°). Зная, что раствор одной грамм-молекулы в 1 л воды (т. е. молярной концентрации, равной единице) соответствует понижению точки замерзания (Д) на 1,85° и осмотическому давлению в 22,4 атм., легко определить величину осмотического давления гноя и сыворотки в атмосферах. После
каждого определения пробирку с термометром Бекмана извлекают из стеклянного футляра, через боковой отросток выливают исследованную жидкость, несколько раз промывают пробирку, термометр и мешалку водопроводной водой, а затем 2 раза дистиллированной водой; ополаскивают подлежащей исследованию жидкостью и затем ею же заполняют пробирку для нового определения точки замерзания.

Определение рН экссудата и ткани воспалительного очага при помощи автоматического рН-метра (демонстрация). В измерительную кювету стеклянного электрода малого объема (0,2—0,05 мл) помещают сначала сыворотку здоровой собаки, исследуемый экссудат и, произведя необходимые включения, снимают показания шкалы с точностью до 0,01. Подключают к прибору игольчатый электрод и, последовательно вкалывая его в здоровую ткань поблизости от очага воспаления, а затем — на периферии и в центре очага, снимают показания прибора и делают выводы о характере и степени сдвигов кислотно-щелочного равновесия при остром воспалении.

На белой бумаге размещают в один ряд 14 чисто вымытых предметных стекол и перед каждым из первых 12 стекол обозначают величину рН, начиная со значения рН 5,8, с интервалом в 0,2, т. е. рН 6; 6,2; 6,4 и т. д. до рН 8,0. Перед 13-м стеклом пишут слово «гной» («Г»), а перед 14-м — слово «сыворотка» («С»). На обе половины каждого из 12 стекол наносят по одной падающей капле буферного раствора с соответствующим значением рН. Затем к верхнему ряду капель буфера прибавляют по одной падающей капле индикатора бромкрезолпурпур, а к нижнему ряду капель — по одной капле индикатора фенолрот.
Таким образом приготовляют 2 цветных параллельных ряда буферных растворов: один с бромкрезолпурпу-ром, другой — с фенолротом. Студенты убеждаются в том, что индикатор бромкрезолпурпур действительно меняет свой цвет в пределах значений рН от 5,2 до 6,8, а индикатор фенолрот — в пределах рН от 6,8 до 8,0.
На обе половины предметного стекла для гноя наносят по одной падающей капле гноя, в одну из которых добавляют каплю индикатора бромкрезолпурпур, а в другую — каплю индикатора фенолрот. Определяют, с каким буферным раствором совпадает по цвету проба испытуемого гноя. Очевидно, что рН гноя и соответствующего по цвету буферного раствора будут одинаковы в пределах 0,1.значения рН. Аналогично определяют и рН свежей сыворотки крови собаки.