В пробирку, находящуюся на водяной бане (в стаканчике с водой 37— 38°), берут 0,1 мл цитратной плазмы крови контрольной собаки, через 60 секунд прибавляют 0,1 мл 5% раствора хлористого кальция, перемешивают, одновременно пускают секундомер (или замечают время по секундной стрелке ручных часов). Отмечают время начала образования сгустка—время рекальцификации плазмы.
Через 3—4 минуты сгусток наматывают на стеклянную палочку, затем его извлекают из пробирки, тщательно высушивают путем сдавливания между двумя листками фильтровальной бумаги и взвешивают на торсионных весах. Получается количество воздушно-сухого фибрина.
Определения производятся и с плазмой подопытной собаки. Эти и все последующие определения дублируются.

В пробирку, находящуюся на водяной бане, берут 0,1 мл нормальной оксалатной плазмы и прибавляют 0,1 мл раствора тромбопластина. Через 30 секунд прибавляют 0,1 мл 0,55% раствора хлористого кальция и одновременно пускают секундомер. Отмечается время свертывания смеси — время протромбинового комплекса. Затем определяется время протромбинового комплекса плазмы подопытной собаки.
Протромбиновый индекс получается, если время протромбинового комплекса здоровой плазмы разделить на время протромбинового комплекса исследуемой плазмы и полученное частное умножить на 100.

Исследуемую оксалатную плазму нормальной собаки разводят физиологическим раствором в 20 раз. Определение ведут на водяной бане.
В пробирку вносят 0,1 мл старой донорской плазмы и 0,1 мл разведенной нормальной плазмы. Через 30 секунд добавляют 0,05 мл раствора тромбопластина и еще через 30 секунд прибавляют столько же 0,55% раствора хлористого кальция. Одновременно пускают секундомер и регистрируют время свертывания смеси. Таким же образом определяют время свертывания смеси с опытной плазмой.
Количество Ас-глобулина равно времени свертывания смеси с нормальной плазмой, разделенному на время свертывания смеси с опытной плазмой и умноженному на 100.

В пробирку, находящуюся на водяной бане, вносят 0,5 мл оксалатной плазмы от здоровой собаки и 0,1 мл раствора гепарина; через 60 секунд туда же вводят 1 мл 0,28% раствора хлористого кальция и одновременно пускают секундомер. Определяют время свертывания плазмы.
Определение проводится и с плазмой подопытной собаки.

В пробирку, находящуюся на водяной бане, вносят 0,1 мл цитратной плазмы здоровой собаки. Прибавляют 0,1 мл физиологического раствора и 0,1 мл раствора тромбина. Одновременно с введением тромбина пускают секундомер.
Время, прошедшее от момента введения тромбина до момента образования сгустка, является тромбиновым.
Определение делают и с плазмой подопытной собаки.

В пробирку, находящуюся на водя-нрй бане, вносят 0,1 мл цитратной плазмы и 0,1 мл 0,1% раствора толуидиновой сини.
Через 30 секунд вводят 0,1 мл раствора тромбина и пускают секундомер. Укорочение времени свертывания смеси происходит за счет блокады гепарина толуидиновой синью.
Определение производится и с плазмой подопытной собаки.
Полученные данные у здоровой и подопытной собак:' время рекальцификации плазмы, количество фибрина, протромбиновый индекс, количество Ас-глобулина, толерантность плазмы к гепарину, тромбиновое время и свободный гепарин крови заносят в таблицу и сопоставляют. Используя прилагаемую схему свертывания, студенты делают заключение о причинах и механизмах нарушения свертываемости крови у собаки с экспериментальной механической желтухой.

Кровь на исследование берут из вены в 2 пробирки. В 1-й пробирке кровь смешивают с 1,34% раствором оксалата натрия в пропорции 9:1, во 2-й — с 3,8% раствором цитрата натрия в той же пропорции. Пробирки центрифугируют 10 минут при 2000 об/мин. Плазму отсасывают и хранят в холодильнике. Годна для использования в течение 3 часов.

Для опыта необходим раствор тромбина, содержащий 1 единицу активности в 1 мл.
Определение единиц тромбина производится с цитратной плазмой человека: 10 мг тромбина растворяют в 10 мл физиологического раствора. 0,1 мл раствора тромбина добавляют в 0,1 мл плазмы и при температуре 37° устанавливают время свертывания. Нужно прибавить столько физиологического раствора к тромбину, чтобы плазма после добавления тромбина свертывалась за 30 секунд. Объем физиологического раствора в миллилитрах, в котором растворен 1 мг тромбина, покажет количество единиц активности в 1 мг сухого препарата. Для приготовления необходимого раствора тромбина берут соответствующую навеску сухого тромбина.

100 мг сухого тромбопластина взвешивают в 10 мл физиологического раствора, нагревают на водяной бане при температуре 50—55° 10 минут при постоянном помешивании. Затем пробирку ставят в холодильник (+4°) на 30 минут, после чего центрифугируют 2 минуты (при 1000 об/мин). Опалесцирующая жидкость отсасывается и используется как раствор тромбопластина. При хранении в холодильнике годен в течение недели.
Примечание. Сухой тромбопластин можно изготовить самим из свежего мозга человека (погибшего от случайной травмы) или собаки. Для этого мозг освобождают от сосудов и мозговых оболочек и тщательно отмывают от крови. Скальпелем соскабливают серое вещество и тщательно (!) растирают в ступке минут 40.
Образовавшуюся массу размазывают тонким слоем на стекле и высушивают при комнатной температуре недели 2—3. По истечении этого срока порошок тромбопластина соскабливают и проверяют на активность. Оксалатная плазма здорового человека при добавлении к ней хлористого кальция и раствора приготовленного тромбопластина должна свертываться за 25—30 секунд. В запаянных ампулах сухой тромбопластин сохраняет свою активность в течение 3 лет.

Механическая желтуха у собаки достигается перевязкой общего желчного протока.
У животного, находящегося под любым видом обезболивания, срединным разрезом (12—15 см) вскрывают брюшную полость. Рану максимально расширяют ранорасширителем. Кишечник отодвигают в левую нижнюю часть брюшной полости. Находят фиксированную двенадцатиперстную кишку, которую слегка оттягивают книзу; этим достигается натяжение общего желчного протока. Под него подводят лигатуру при помощи иглы Дешампа, проток перевязывают. Рану послойно зашивают. Вводят антибиотики.